三種顏色的貓一定是母貓嗎？

是的。

而對于雌性貓（XX型），它有2條X染色體，當它為純合子時（XAXA或XaXa）時，情況同上；當它為雜合子（XAXa）時，X染色體會有一條隨機失活，所以貓的的細胞中只有一條染色體得到表達，不是XA（黃色）就是Xa(黑色)，再加上基因不表達（白色），所以只有雌性貓才有可能同時表現出黃、黑、白三種顏色。