牛血清白蛋白的提取和鑒定方法(設計性實驗報告)

牛血清白蛋白的提取操作步驟：

1、鹽析取離心管一支加入牛血清2mL、加入等量PBS（磷酸鹽緩沖生理鹽水）稀釋血清，搖勻后，逐滴加入pH7.2飽和硫酸銨溶液2mL，邊加邊搖，充分混勻，然后靜止放臵10分鐘，再離心（2000r/min）10min，將上清液傾入試管中。

2、取干凈的比色板，在各孔內滴加一滴納氏試劑

3、取玻璃紙一張，折成袋形，將離心后的上清液倒入袋內，用線扎緊上口（注意要留有空隙），用玻璃棒懸在盛有半杯蒸餾水的100mL燒杯內，使透析袋下半部侵入水中，對蛋白液進行透析，常用玻璃棒攪拌袋外（燒杯中）液體，以縮短透析時間。

4、每隔2分鐘檢查一次，更換蒸餾水多次，用納氏試劑檢查袋外液體的NH4+，觀察顏色變化并記錄，直至袋內鹽分透析完畢。

5、將袋內液體傾入試管，即得牛血清白蛋白溶液。

牛血清白蛋白的鑒定方法：

1、點樣取一張膜條，將薄膜無光澤面向下，放入培養皿中的***緩沖液中使膜條充分浸透，取出，用干凈濾紙吸去多余的緩沖液，以薄膜的無光澤面距一端1.5㎝處做點樣線，將牛血清樣品與待測的牛血清白蛋白溶液分別用點樣器在同一張薄膜的點樣線處不同位置點樣。標準液點一次，待測液點三次。

2、電泳將點樣后的膜條致于電泳槽架上，放置時膜條無光澤面向下，點樣端致于陰極，待平衡5min后，打開電源，調節電源，調節電泳儀的電壓為160伏，通電60min，關閉電源后用鑷子將模條取出。

3、 染色將膜條直接浸于盛有氨基黑10B的染色液中，染2分鐘后取出，立即浸于漂洗液中，分別在漂洗液1、2、3中各漂洗5min，直至背景漂洗干凈為止，用濾紙吸干薄膜。

4、鑒定比較樣品和待測液中白蛋白在薄膜上的電泳結果，看位置是否一致。

擴展資料：

牛血清白蛋白

牛血清中的簡單蛋白，是血液的主要成分（38g/1000ml），分子量68kD。等電點4.8。含氮量16%，含糖量0.08%。僅含已糖和已糖胺，含脂量只有0.2%。白蛋白由581個氨基酸殘基組成，其中35個半胱氨酸組成17個二硫鍵，在肽鏈的第34位有一自由巰基。白蛋白可與多種陽離子、陰離子和其他小分子物質結合。

血液中的白蛋白主要起維持滲透壓作用、PH緩沖作用、載體作用和營養作用。在動物細胞無血清培養中，添加白蛋白可起到生理和機械保護作用和載體作用。牛血清白蛋白（BSA），又稱第五組分，是牛血清中的一種球蛋白，包含583個氨基酸殘基，分子量為66.430 Da，等電點為4.7。牛血清白蛋白在生化實驗中有廣泛的應用，例如在western blot中作為Blocking agent。

參考資料來源：百度百科-牛血清白蛋白

牛血清白蛋白熱乙醇法提取工藝：

分離血漿，在牛血中加入枸櫞酸鈉離心，提取，將收集的血漿放入夾層反應罐內，加熱加入辛酸鈉，緩慢攪拌，溫度在55℃～65℃，加入鹽酸調pH值至4.0～6.5，然后加乙醇，過濾，脫鹽和濃縮，凍干為成品。

具體為以下步驟：

A、分離血漿，取新鮮牛血放入帶制冷功能的離心機中，加入血量的10％的濃度為3.8％的枸櫞酸鈉，離心，溫度在2℃以下，分離血漿、血球，收集血漿，血球另用； B、提取，將血漿放入夾層反應罐內，夾層內加熱水，邊加熱邊加入牛血清容積的0.2-0.3％的辛酸鈉，緩慢攪拌，溫度在55℃～65℃，溶解后調PH值，加入濃度為1摩爾的鹽酸，將PH調至4.0～6.5，然后加入血清總量的5.5％的濃度為95％的乙醇，過濾，濾渣棄之； C、脫鹽和濃縮，將濾液用20000分子量以下的超濾器洗脫鹽類及其它小分子雜質，同時進行濃縮； D、凍干，將濃縮液按凍干曲線凍干，即將濃縮液迅速冷卻至-40℃，持續1小時左右，升到-25℃，持續10-20小時，再緩慢升溫到0℃，再持續1-4小時升到保存溫度20℃。，為成品。

反膠團相轉移法:

利用CTAB/正辛醇:***(4:1V/V )反膠團體系對牛血清白蛋白(BSA)進行相轉移中,通過對萃取體系水相的pH值、離子強度、兩液相的體積比、小分子糖(葡萄糖、蔗糖)及助表面活性劑(直鏈醇分子)等因素的改變,探討了BSA在陽離子表面活性劑體系的萃取機理;研究結果表明選擇合適的條件提取BSA時,萃取率可達到97％,反萃率達到了85％;找到實現牛血清白蛋白分離提純的有效方法.